Влияние перфторана на соединительную ткань регенерирующей печени крыс


П.Г. Распутин, А.А. Косых, И.В.Зубков
Кировская государственная медицинская академия, г. Киров

Эксперименты проводились на 72 белых беспородных крысах. В опыт брали молодых животных обоего пола, массой  от 280 до 350 г. Все животные были поделены на три группы. Животные 1-й группы служили контролем. Животным второй группы производили резекцию печени в объеме 50%, а животным третьей группы - резекцию и введение перфторана (ПФ) в дозе 1 мл. на 100г.массы тела.  Забои животных производились на 2, 3, 7 и 30 сутки. Состояние соединительной ткани определяли по содержанию коллагеновых белков и объемной плотности волокнистых структур печени.

Для исследования брались кусочки печени, из которых после фиксации в 10% растворе нейтрального формалина путем обезвоживания в спиртах восходящей концентрации изготавливались парафиновые блоки. На срезах, окрашенных по Ван-Гизон, при увеличении 10´1,25´40 определяли объемную плотность соединительнотканных волокнистых структур. Измерения проводили при помощи адаптивной окулярной морфометрической сетки с равномерным шагом (25 узлов). Содержание коллагеновых белков оценивали по количеству гидроксипролина, определяемого в сухой обезжиренной печени после гидролиза в 6Н  HCl методом  I. Bergman, R. Loxsley  в модификации А. А. Косых. Гидроксипролин является специфичной для коллагена аминокислотой. Данный метод позволяет получить специфическое окрашивание при взаимодействии гидроксипролина с парадиметиламинобензальдегидом в кислой среде в присутствии окислителя- хлорамина Б и изопропилового спирта. Интенсивность окрашивания оценивали спектрофотометрически.

При определении гидроксипролина у здоровых крыс после резекции печени  получены следующие данные: через 2 суток после операции содержание гидроксипролина снизилось на 36% относительно исходного уровня, который составил 1,94±0,019мг%. К 3 и 7 суткам данный показатель достоверно не изменился (1,26±0,14 и 1,34±0,12). К 30 суткам содержание гидроксипролина приближалось к норме (1,66± 0,11), но оставалось достоверно ниже последней (Рис.1).

 

 

При введении ПФ после резекции, на 2-е сутки  наблюдалось снижение  гидроксипролина до 1,19±0,14, к 3-м суткам оно несколько повысилось 1,65±0,23, к 7-м суткам произошло снижение содержания гидроксипролина почти вдвое относительно предыдущего срока исследования. На 30-е сутки данный показатель составил 2,02±0,26, что достоверно не отличалось от нормы. 

 

При определении объемной плотности (ОП) соединительнотканных волокнистых структур получены следующие результаты:

В группе резецированных животных ко 2-м суткам произошло снижение ОП до 0,056±0,0014 усл.ед., что на 40% ниже нормы (0,109±0,015). К 3-м и 7-м суткам данный показатель достоверно не изменился относительно предыдущего срока исследования, а к 30-м суткам составил 0,097±0,007 усл.ед.

Во 2-й группе животных ко 2-м суткам ОП составила 0,086±0,01, к 3-м практически не изменилось. На 7-е сутки исследования ОП достоверно снизилась и составила 0,068±0,005 усл.ед. К 30-м суткам данный показатель достоверно не отличался от нормы (Рис.2). 

 

Таким образом, видно, что динамика как гидроксипролина, так и объемной плотности волокнистых структур в каждой группе примерно совпадают, причем более выраженное совпадение в группе животных, получающих перфторан.

Обращает на себя внимание выраженное падение обоих показателей на 7-е сутки во второй группе. Ранее было показано [1] значительное увеличение митотической активности гепатоцитов на 7-е сутки у крыс, которым вводилась перфторуглеродная эмульсия, по сравнению с контролем (более чем в 10 раз). В то же время в предыдущие сроки наблюдения (2-е и 3-и сутки) это увеличение было не более, чем в 1,5 раза. Это свидетельствует о стимуляции перфтораном паренхиматозных элементов печени. Это явление можно объяснить с позиций учения Б.П. Солопаева и его школы (д.м.н. проф. А.А. Косых и др.) [2, 3], где выдвинута теория корреляции взаимоотношений между интенсивностью пролиферативных процессов паренхиматозных элементов и состоянием соединительной ткани. По-видимому, соединительная ткань может оказывать тормозящее влияние на течение регенерации паренхиматозных элементов, вплоть до полного подавления регенерации. В то же время интенсивная регенерация паренхиматозных элементов может влиять  на состояние соединительной ткани, вызывая в некоторых случаях не только задержку роста соединительной ткани, но и ее резорбцию, что и наблюдается в настоящем исследовании.


  Используемая литература:

  1. Распутин П.Г. Применение эмульсий перфторорганических соединений в резекционной хирургии печени: Дис. … докт. мед. наук. – Пермь, 2000. – 340 с.
  2. Солопаев Б.П. О коррелятивных взаимоотношениях между интенсивностью регенерации паренхиматозных элементов и состоянием соединительной ткани // Сб. трудов по исследованию обратимости острых и хронических изменений органов. – М,1962. – c. 172-180.
  3. Косых А.А. Соединительная ткань печени в норме, при хроническом гепатите и циррозе в условиях регенерации: Дис. докт. мед. наук. – М., 1992. – 475 с.