Исследование активности дегидрогеназ в нефроцитах при острой массивной кровопотере и ее возмещении


Тамаева Ф.А., Голубев А.М.
Дагестанская государственная медицинская академия, Махачкала
ГУНИИ общей реаниматологии РАМН, Москва


Массивная кровопотеря является причиной гипоксии и нарушения метаболизма органов и тканей, что ведет к грубейшим повреждениям их структуры. Цель работы: изучение гистоэнзиматических изменений в почках экспериментальных животных при массивной кровопотере с последующей перфузией кровезамещающими растворами.

Исследование проведено на половозрелых самцах белых крыс массой 160 - 240 г. Было выделено 5 групп: 1 группа (контрольная) – интактные крысы (без кровопотери); 2 группа – крысы с кровопотерей до 50 % объема циркулирующей крови; 3 группа – крысы с кровопотерей до 50 % объема циркулирующей крови и перфузией физраствором; 4 группа – крысы с кровопотерей до 50 % объема циркулирующей крови и перфузией гепаринизированной аутокровью; 5 группа – крысы с кровопотерей до 50 % объема циркулирующей крови и перфузией перфтораном. Острую кровопотерю осуществляли однократным выпусканием крови из хвостовой артерии из расчета 2,5 мл крови на 100 г массы тела в течение 15 - 20 мин. Возмещение кровопотери производили спустя 60 мин после остановки кровотечения путем внутриартериального введения растворов в дозе, возмещающей объем кровопотери. Взятие материала – через 1, 4, 7 и 14 суток. Исследование проводили на криостатных срезах почек толщиной 10 мкм. Исследовали активность ферментов: сукцинатдегидрогеназы (СДГ), глутаматдегидрогеназы (ГДГ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), НАД- и НАДФ-диафораз, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) и щелочной фосфатазы (ЩФ). В качестве контроля использовали безсубстратные среды. Количественную оценку активности ферментов в проксимальных извитых канальцах (ПИК) и дистальных извитых канальцах (ДИК) проводили при помощи автоматизированной системы анализа изображения «МЕКОС-Ц1» и специальной программы «Денситоморфометрия» в оптических единицах.

Были выявлены существенные различия в активности ферментов. В 3 группе в ПИК и в ДИК отмечали падение активности СДГ в 1-е сутки до 0,6 и постепенный рост показателя активности до 0,75 на 14 сутки. Активность ГДГ в 1 сутки была высокой в ПИК и составила ~ 1,65, в дальнейшем отмечали стабилизацию активности фермента до 0,96, соответствующие показатели в ДИК составили от ~ 1,86 до ~ 1,0. Активности ЛДГ в ПИК равнялась 1,37 с ростом до 1,46 к 7-м суткам и последующим падением до 1,22. В ДИК активность ЛДГ характеризовалась стабильным ростом во всех сроках исследования. Активность НАД-диафоразы, Г-6-ФДГ незначительно колебалась. В 4 группе активность СДГ в ПИК в первые сутки составила ~ 0,75 с ростом до 1,18 к 14 суткам (в 1 группе активность равна 1,2), в ДИК соответственно – с 0,84 до 1,3 (в 1 группе – 1,0). Активность ГДГ в ПИК в первые сутки составляла ~ 1,17 и стабилизировалась к 14 суткам до 0,88. ЛДГ в ПИК и ДИК была снижена в 1 сутки, отмечали ее постепенный рост к 14 суткам. Активность НАД-диафоразы в ПИК составляла от 0,41 в первые сутки, к 14 суткам ~ 0,66 (контрольная цифра ~ 0,9). Колебания активности НАДФ-диафоразы имели аналогичный характер. Активность НАД в ДИК варьировала от 0,35 (1 сутки) до 0,92 (14 сутки). Активность Г-6-ФДГ в первые сутки в ПИК составляла до 0,13 (1 группе 0,32), а в ДИК до 0,22 (контроль ~ 0,22). К 7 суткам она возрастала в ПИК – 0,44, а в ДИК – 0,45, а на 14 сутки снижалась в ПИК до 0,12, а в ДИК до 0,16. В 5 группе активность СДГ в первые сутки достигала в ПИК ~ 0,85, а к 14 суткам – 1,92, а в ДИК соответственно от 0,88 до 1,61. Активность ГДГ, высокая с первых суток, к 14 суткам достигала в ПИК – 1,04, а в ДИК – 1,01. Активность ЛДГ, в первые сутки также высокая, к 14 суткам достигала показателей контроля. НАД-диафораза в ПИК имела стабильный характер в пределах ~ 0,66 – 0,70, однако в ДИК отмечали заметное повышение активности от 1,04 до 1,37. Активность НАДФ-диафоразы в ПИК, сниженная до ~ 0,1 в 1 сутки, к 7 суткам достигала контрольных значений (0,25), а к 14 суткам была равна 0,31. В ДИК активность НАДФ-диафоразы почти стабильна. Активность Г-6-ФДГ имела незначительные колебания в ПИК, а в ДИК характеризовалась повышением активности к 14 суткам до контрольных цифр.

На основании проведенного количественного гистоэнзиматического исследования выявлена различная активность ферментов, что позволяет говорить о степени повреждения эпителия ПИК и ДИК. Снижение активности СДГ, а также различная активность ЛДГ во всех группах животных по сравнению с контрольной группой свидетельствует о подавлении окислительно-восстановительных процессов и повышении активности анаэробного окисления. Подтверждением этому служит снижение активности НАД-диафоразы – одного из основных ферментов тканевого дыхания в аэробных условиях. При перфузии физиологическим раствором активность ферментов частично приближается к контролю на 14 сутки. При введении аутокрови наблюдается существенное понижение соответствующих показателей. При применении перфторана активность ферментов приближается к контрольным значениям уже на 4 сутки. Таким образом, можно предположить, что ранняя перфузия физраствором или перфтораном больше способствует поддержанию тканевого метаболизма, стабилизации кровообращения и газообмена по сравнению с аутокровью.